國產(chǎn)細胞培養(yǎng)基常見問題及解決方法（二）

1.冷凍管應(yīng)如何解凍？

       取出冷凍管后，須立即放入 37°C 水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在 1 分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。冷凍管由液氮桶中取出解凍時，須注意**，預(yù)防冷凍管之爆裂。

2.細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時，是否應(yīng)馬上去除 DMSO？

       除少數(shù)特別注明對 DMSO 敏感之細胞外，絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞），在解凍之后，應(yīng)直接放入含有 10-15ml 新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。

3.如何用臺盼蘭計數(shù)活細胞？

       用無血清培養(yǎng)基把細胞懸液稀釋到 200～2000 個/毫升，在 0.1 毫升的細胞懸液中加入0.1 毫升的 0.4％的臺盼蘭溶液。輕輕混勻，數(shù)分鐘后，用血球計數(shù)板計數(shù)細胞。活細胞排斥臺盼蘭，因而染成藍色的細胞是死細胞。

4.冷凍保存細胞之方法？

       冷凍保存方法一:冷凍管置于 4°C 30-0 分鐘→(-20°C30 分鐘*)→-80°C16~18 小時(或隔夜)→液氮槽 vaporphase 長期儲存。冷凍保存方法二:冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降 1-3°C 至–80°C 以下，再放入液氮槽 vaporphase 長期儲存。*-20°C 不可超過 1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80°C 冰箱中，存活率稍微降低一些。